Physical-chemical influences and cell behavior of natural compounds on titanium dental surfaces

Abstract The present study evaluated the influence of carvacrol, terpinene-4-ol, and chlorhexidine on the physical-chemical properties of titanium surfaces, cell viability, proliferation, adhesion, and spreading of fibroblasts and osteoblasts in vitro. Titanium surfaces (Ti) were treated with Carvacrol (Cvc), Terpinen-4-ol (T4ol), Chlorhexidine (CHX), DMSO, and ultrapure water (Control group). Physical-chemical modifications were evaluated by surface wettability, the surface free energy (SFE) calculated from the contact angle values using the Owens-Wendt-Rabel-Kaeble (OWRK) equation, scanning electron microscopy (SEM) and energy dispersive spectrometry probe (EDS) system. Cells were seeded onto Ti-treated surfaces and incubated for 24 h and 72 h, then evaluated by Alamar blue assay and fluorescence microscopy. Surfaces treated with Cvc and T4ol showed the presence of Na, O, and Cl. All surfaces showed hydrophilic characteristics and SFE values between 5.5 mN/m and 3.4 mN/m. On the other hand, EDS peaks demonstrated the presence of O and Cl after CHX treatment. A reduction of cell viability and adhesion was noted on titanium surfaces treated with CHX after 24 and 72h. In conclusion, the results indicate that the decontamination with Cvc and T4ol on Ti surfaces does not alter the surface proprieties and allows an adequate interaction with cells involved in the re-osseointegration process such as fibroblasts and osteoblasts.

Resumo O presente estudo avaliou a influência do carvacrol, terpineno-4-ol e clorexidina nas propriedades físico-químicas de superfícies de titânio, viabilidade celular, proliferação, adesão e esplhamento de fibroblastos e osteoblastos in vitro. Superfícies de titânio (Ti) foram tratadas com Carvacrol (Cvc), Terpinen-4-ol (T4ol), Clorexidina (CHX), DMSO e água ultrapura (Grupo Controle). As modificações físico-químicas foram avaliadas pela molhabilidade da superfície, a energia livre de superfície (ELS) calculada a partir dos valores do ângulo de contato usando a equação de Owens-Wendt-Rabel-Kaeble (OWRK), microscopia eletrônica de varredura (MEV) e espectroscopia de raios X por energia dispersiva (EDS). As células foram semeadas em superfícies tratadas com Ti e incubadas por 24 h e 72 h, e avaliadas pelo ensaio Alamar blue e microscopia de fluorescência. As superfícies tratadas com Cvc e T4ol mostraram a presença de Na, O e Cl. Todas as superfícies apresentaram características hidrofílicas e valores de ELS entre 5,5 mN/m e 3,4 mN/m. Por outro lado, os picos de EDS demonstraram a presença de O e Cl após o tratamento com CHX. Uma redução da viabilidade celular e adesão foi observada em superfícies de titânio tratadas com CHX após 24 e 72h. Em conclusão, os resultados indicam que a descontaminação com Cvc e T4ol em superfícies de Ti não altera as propriedades da superfície e permite uma interação adequada com células envolvidas no processo de reosseointegração como fibroblastos e osteoblastos.

Antibiofilm efficacy of tea tree oil and of its main component terpinen-4-ol against Candida albicans

Abstract Candida infection is an important cause of morbidity and mortality in immunocompromised patients. The increase in its incidence has been associated with resistance to antimicrobial therapy and biofilm formation. The aim of this study was to evaluate the efficacy of tea tree oil (TTO) and its main component - terpinen-4-ol - against resistant Candida albicans strains (genotypes A and B) identified by molecular typing and against C. albicans ATCC 90028 and SC 5314 reference strains in planktonic and biofilm cultures. The minimum inhibitory concentration, minimum fungicidal concentration, and rate of biofilm development were used to evaluate antifungal activity. Results were obtained from analysis of the biofilm using the cell proliferation assay 2,3-Bis-(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide (XTT) and confocal laser scanning microscopy (CLSM). Terpinen-4-ol and TTO inhibited C. albicans growth. CLSM confirmed that 17.92 mg/mL of TTO and 8.86 mg/mL of terpinen-4-ol applied for 60 s (rinse simulation) interfered with biofilm formation. Hence, this in vitro study revealed that natural substances such as TTO and terpinen-4-ol present promising results for the treatment of oral candidiasis.

Interactions between Terpinen-4-ol and Nystatin on biofilm of Candida albicans and Candida tropicalis

Abstract The aim of this study was to evaluate the antifungal activity of Terpinen-4-ol associated with nystatin, on single and mixed species biofilms formed by Candida albicans and Candida tropicalis, as well as the effect of terpinen-4-ol on adhesion in oral cells and the enzymatic activity. The minimum inhibitory concentrations and minimum fungicide concentrations of terpinen-4-ol and nystatin on Candida albicans and Candida tropicalis were determined using the microdilution broth method, along with their synergistic activity ("checkerboard" method). Single and mixed species biofilms were prepared using the static microtiter plate model and quantified by colony forming units (CFU/mL). The effect of Terpinen-4-ol in adhesion of Candida albicans and Candida tropicalis in coculture with oral keratinocytes (NOK Si) was evaluated, as well as the enzymatic activity by measuring the size of the precipitation zone, after the growth agar to phospholipase, protease and hemolysin. Terpinen-4-ol (4.53 mg mL-1) and nystatin (0.008 mg mL-1) were able to inhibit biofilms growth, and a synergistic antifungal effect was showed with the drug association, reducing the inhibitory concentration of nystatin up to 8 times in single biofilm of Candida albicans, and 2 times in mixed species biofilm. A small decrease in the adhesion of Candida tropicalis in NOK Si cells was showed after treatment with terpinen-4-ol, and nystatin had a greater effect for both species. For enzymatic activity, the drugs showed no action. The effect potentiated by the combination of terpinen-4-ol and nystatin and the reduction of adhesion provide evidence of its potential as an anti-fungal agent.

Resumo O objetivo desse estudo foi avaliar a atividade antifúngica do Terpinen4-ol associado à nistatina em biofilmes simples e misto, formados por Candida albicans e Candida tropicalis, bem como o efeito do terpinen-4-ol na adesão em células orais e atividade enzimática. As concentrações inibitórias mínimas e as concentrações fungicidas mínimas do terpinen-4-ol e da nistatina em Candida albicans e Candida tropicalis foram determinadas pelo método de microdiluição em caldo, juntamente com a atividade sinérgica (método do tabuleiro de "xadrez"). Biofilmes simples e misto foram preparados usando o modelo de placa de microtitulação estática e quantificados por unidades formadoras de colônias (CFU/mL). O efeito do Terpinen-4-ol na adesão de Candida albicans e Candida tropicalis em co-cultura com queratinócitos orais (NOK Si) foi avaliado, bem como a atividade enzimática, medindo o tamanho da zona de precipitação, após o crescimento em ágar fosfolipase, protease e hemolisina. O terpinen-4-ol (4.53 mg mL-1) e a nistatina (0,008 mg mL-1) conseguiram inibir o crescimento de biofilmes e um efeito antifúngico sinérgico foi demonstrado com a associação de fármaco, reduzindo a concentração inibidora de nistatina até 8 vezes em biofilme simpes de Candida albicans e 2 vezes em biofilme misto. Uma pequena diminuição na adesão de Candida tropicalis em células NOK Si foi mostrada após o tratamento com terpinen-4-ol e a nistatina teve um efeito maior para ambas as espécies. Para a atividade enzimática, as drogas não apresentaram ação. O efeito potencializado pela combinação de terpinen-4-ol e nistatina e a redução de adesão evidenciam seu potencial como agente anti-fúngico.

Effect of dietary sugars on dual-species biofilms of Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus – a pilot study / Efeito dos açucares da dieta em biofilme dupla espécie de Streptococcus mutans e Streptococcus sobrinus – um estudo piloto

Introduction: Frequent consumption of sugars and the presence of Streptococcus mutans and Streptococcus sobrinus are correlated with higher caries experience. Objective: The aim of this pilot study was to elucidate the effect of different fermentable carbohydrates on biomass formation and acidogenicity of S. mutans and S. sobrinus biofilms. Material and method: Single and dual-species biofilms of S. mutans ATCC 25175 and S. sobrinus ATCC 27607 were grown at the bottom of microtiter plates at equal concentrations for 24 h at 37 °C under micro-aerobic atmosphere. Carbohydrates were added at 2% concentration: maltose, sucrose, glucose and lactose. BHI Broth (0.2% glucose) was used as negative control. Acidogenicity was assessed by measuring the pH of spent culture medium after 24 h, immediately after refreshing the culture medium and for the next 1 h and 2 h. Crystal violet staining was used as an indicator of the total attached biofilm biomass after 24 h incubation. Data were analyzed by two-way ANOVA followed by Bonferroni post hoc test. Significance level was set at 5%. Result: All carbohydrates resulted in higher biomass formation in single- and dual-species biofilms when compared to the control group. Sucrose, lactose and maltose showed higher acidogenicity than the control group in both single- and dual-species biofilms after 24 h. Conclusion: These findings indicate that the type of biofilm (single- or dual-species) and the carbohydrate used may influence the amount of biomass formed and rate of pH reduction.

Introdução: O consumo frequente de açucares e a presença de Streptococcus mutans e Streptococcus sobrinus estão correlacionados com maior experiência de cárie. Objetivo: Elucidar o efeito de diferentes carboidratos fermentáveis na biomassa e acidogenicidade de biofilmes formados por S. mutans e S. sobrinus. Material e método: Biofilmes única e dupla- espécie de S. mutans ATCC 25175 e S. sobrinus ATCC 27607 em concentrações iguais cresceram no fundo de placas de microtitulação por 24 h a 37 °C em microaerofilia. Maltose, sacarose, glicose e lactose foram adicionados a 2%. BHI caldo (0.2% glicose) foi usado como controle negativo. Acidogenicidade foi avaliada por meio da medição do pH do meio de cultura após 24 h, imediatamente após troca de meio e nas próximas 1 h e 2 h. Coloração por cristal violeta foi usada como indicador do total de biomassa aderida, após 24 h de incubação. Os dados foram analisados por teste ANOVA two way e Teste de Bonferroni. O nível de significância foi de 5%. Resultado: Todos os carboidratos resultaram em maior formação de biomassa em ambos os tipos de biofilme (única ou dupla- espécie), quando comparado ao grupo controle. Sacarose, lactose e maltose mostraram maior acidogenicidade que o grupo controle após 24 h nos biofilmes única ou dupla-espécie, apenas após 24 h. Conclusão: Os achados indicam que o tipo de biofilme (única ou dupla- espécie) e o tipo de carboidrato usado podem influenciar tanto na quantidade de biomassa formada quanto na taxa de redução do pH.

Influence of different fermentable carbohydrates on dual species biofilms of S. mutans and A. naeslundii: a pilot study / Influência de diferentes carboidratos fermentáveis em biofilmes de duas espécies com S. mutans e A. naeslundii - um estudo piloto

Objetivo: O propósito deste estudo foi analisar o efeito da presença de diferentes carboidratos fermentáveis na biomassa e acidogenicidade do biofilme formado por Streptococcus mutans ATCC 25175 em associação com Actinomyces naeslundii ATCC 19039. Material e Métodos: Biofilmes com uma ou duas espécies cresceram em poços de placas de microtitulação em igual concentração, por 24 h a 37 ºC. Carboidratos foram adicionados em concentração de 2%: maltose, sacarose, glicose e lactose, além disso, como controle negativo, caldo BHI (0.2% de sacarose) foi usado. O pH foi medido individualmente para avaliar a acidogenicidade após 24 h, imediatamente após troca do meio de cultura e 30 min, 1 h e 2 h depois. Cristal violeta foi usado como indicador do total de biomassa formada após 24 h de incubação e a absorbância foi medida a 590 nm. Teste de Tukey foi utilizado para todas as análises estatísticas. Resultados: Em geral, maior quantidade de biomassa foi formada por biofilmes dupla-espécie que única-espécie na presença de todos os carboidratos, exceto glicose. Biofilmes formados por S. mutans mostraram significativamente maior acidogenicidade que o grupo controle apenas após 24 h. Em biofilmes dupla-espécie, maior acidogenicidade foi encontrada após 24 h na presença de sacarose, lactose, maltose e no grupo controle. Conclusão: Esses achados indicam que o tipo de biofilme e o carboidrato usado podem influenciar ambas: formação de biomassa e taxa de queda do pH.

Objective: The aim of this study was to elucidate the effect of presence of different fermentable carbohydrates in the biomass and acidogenicity of biofilm formed by Streptococcus mutans ATCC 25175 in association with Actinomyces naeslundii ATCC 19039. Material and Methods: Single and dualspecies biofilms were grown on wells of microtiter plates at equal concentration for 24 h at 37 ºC. Carbohydrates were added at 2%: maltose, sucrose, glucose and lactose and as negative control, BHI Broth (0.2% glucose) was used. The pH of each culture was measured to assess acidogenicity after 24 h, immediately after changing the culture medium and 30 min, 1 h and 2 h after. Crystal violet was used asindicator of the total attached biofilm biomass after 24 h incubation and the absorbance was measured at 590 nm. Tukey Multiple Comparison Test was performed for all the statistical analysis. Results: Higher amount of biomass was formed by dualspecies than single-species biofilm in the presence of all carbohydrates, except to glucose. S. mutans biofilms showed statistically significant higher acidogenicity than control group only after 24 h. In dual-species biofilms the highest acidogenicity were found after 24 h for sucrose, lactose, maltose and the control group. Conclusion: The findings indicate that the type of biofilm (single or dual-species) and the carbohydrate used may influence amount of biomass formed and rate of the pH reduction.

Influence of the addition of chlorhexidine diacetate on bond strength of a high-viscosity glass ionomer cement to sound and artificial caries-affected dentin / Influência da adição do diacetato de clorexidina na resistência de união de um cimento de ionômero de vidro de alta viscosidade à dentina sadia e afetada por cárie artificial

Introduction: The aim of adding chlorhexidine (CHX) to glass ionomer cements (GIC) is to improve their antibacterial property, but it may interfere with their bond to dentin. Objective: To evaluate the influence of adding chlorhexidine diacetate at different concentrations to a high-viscosity GIC on its bond to sound and artificial caries-affected dentin. Material and Method: Eighty human third molars were used, on which an area of dentin was exposed on the occlusal surface. Half of the specimens were kept sound and the other half were subjected to artificially induced caries. CHX was mixed with GIC powder at 0.5%, 1% and 2% (w/w). GIC without CHX was used as control. On each dentin surface a specimen measuring 1 mm in diameter and 1 mm high was made. The samples were kept at 37 °C and 100% humidity for 24 hours and subject to microshear testing. The results were analyzed using Kruskal-Wallis and Mann Whitney tests (α=0.05). Result: There was no significant difference between bond strength of sound and caries-affected dentin (p>0.05). For both substrate conditions, groups GIC, GIC+0.5% CHX and GIC+1% CHX showed statistically similar bond strength (p>0.05), and higher than that of GIC+2% CHX (p≤0.025). Cohesive and mixed failures were predominant in all groups. Conclusion: The addition of 0.5% and 1% chlorhexidine did not result in negative changes in the bond strength of GIC to caries-affected and sound dentin. .

Introdução: A adição da clorexidina (CLX) ao cimento de ionômero de vidro (CIV) visa melhorar a sua propriedade antibacteriana, podendo contudo interferir na adesão à dentina. Objetivo: Avaliar a influência da adição de diacetato de CLX em diferentes concentrações a um CIV de alta viscosidade, na sua adesão à dentina sadia e afetada por cárie artificial. Material e Método: Foram utilizados 80 terceiros molares, que tiveram a superfície de dentina exposta na face oclusal. Metade dos dentes foram mantidos hígidos e a outra metade foi submetida à indução artificial de cárie. A CLX foi misturada ao pó do CIV nas concentrações de 0,5%, 1% e 2%. O CIV sem CLX foi usado como controle. Em cada superfície dentinária foi confeccionado um espécime com 1 mm de diâmetro e 1 mm de altura. Estes foram mantidos a 37 °C com 100% de umidade por 24 horas, e, submetidos ao teste de microcisalhamento. Os resultados foram analisados pelos testes de Kruskal-Wallis e Mann Whitney (α=0.05). Resultado: Não houve diferença estatística entre os valores de resistência de união para dentina hígida e afetada (p>0,05). Para as duas condições do substrato, os grupos CIV, CIV+CLX 0,5% e CIV+CLX 1% apresentaram resistência de união estatisticamente semelhante (p>0,05), e superior ao CIV+CLX 2% (p≤0.025). Houve predominância de fraturas mistas e coesivas do material para todos os grupos. Conclusão: A adição de CLX nas concentrações de 0,5% e 1% não influenciou negativamente na resistência de união de um CIV de alta viscosidade à dentina sadia e afetada por cárie. .

Avaliação comparativa ?in vivo? da eficácia do óleo de melaleuca, clorexidina e listerine sobre streptococcus mutans e microrganismos totais na saliva / ?In Vivo? Comparative Evaluation of the Efficacy of Melaleuca Oil, Chlorhexidine and Listerine against Streptococcus mutans and Total Microorganisms in Saliva

Objetivo: Comparar a eficácia dos enxaguatórios bucais: clorexidina 0,12%, Listerine e óleo de Melaleuca Alternifolia 0,5% e 2% sobre os níveis salivares de Streptococcus mutans e microrganismos totais. Métodos: O estudo foi um ensaio clínico, controlado, duplo cego e emparelhado. Para tanto foram selecionados 26 voluntários com idade entre 21 - 35 anos. Foi coletada de cada participante, no baseline, a quantidade de 1 mL de saliva não estimulada, 1 e 15 min após os bochechos com as seguintes soluções: água destilada estéril, digluconato de clorexidina 0,12%, Listerine (©Johnson & Johnson do Brasil), Melaleuca Alternifolia (Sigma-Aldrich St Louis, MO, USA) nas concentrações de 0,5% e 2%. Os participantes fizeram uso de todos os enxaguatórios bucais pesquisados, com intervalo de 15 dias entre cada solução. Imediatamente após o bochecho, foi coletada a saliva e realizadas as diluições seriadas, seguidas de plaqueamento em meio de cultura Agar sangue para o crescimento de microrganismos totais e SB-20 (Agar Sacarose Bacitracina) para S. mutans, mantidos por 48h a 37°C em microaerofilia. Após o período de incubação, as colônias foram contadas e transformadas em unidades formadoras de colônias (UFC/mL). Resultados: A clorexidina mostrou ação antimicrobiana na redução dos microrganismos totais e S. mutans, enquanto a ação do óleo Melaleuca Alternifolia 0.5% foi semelhante à água destilada. O listerine e o óleoMelaleuca Alternifolia 2% apresentaram redução microbiana, respectivamente, de 11% e 9% para microrganismos totais, entretanto para S. mutans o listerine reduziu os níveis em 20% e o óleo Melaleuca Alternifolia 2% em 11%. Conclusão: O bochecho único com clorexidina 0,12% é eficaz na redução de níveis de microrganismos totais e S. mutans presentes na saliva. Ao comparar a clorexidina com o listerine e óleo Melaleuca Alternifolia 0,5% e 2% nas mesmas condições a eficácia da ação destas soluções é diminuída.

Objective: To compare the efficacy of the mouthwashes 0.12% chlorhexidine, Listerine, and 0.5% and 2% Melaleuca Alternifolia oil against the salivary levels of Streptococcus mutans and total microorganisms.Methods: This study was double-blind controlled and paired clinical assay. Twenty-six volunteers aged 21 to 35 years old were enrolled. At baseline, 1 mL of unstimulated saliva was collected from each subject, 1 and 15 min after mouthrinsing with the following solutions: sterile distilled water, 0.12% chlorhexidine digluconate, Listerine (©Johnson & Johnson do Brasil), 0.5% and 2% concentrations of Melaleuca Alternifolia (Sigma-Aldrich). The volunteers used all the evaluated mouthrinses with a 15-day interval between the solutions. Immediately after rinsing, saliva was collected and serial dilutions were performed, followed by plating in blood agar culture medium for growth of total microorganisms and SB-20 (Sucrose-Bacitracin agar) for growth of S. mutans, and incubation at 37 °C for 48 h in microaerophilia. After incubation, the number of colonies was counted and expressed as colony forming units (UFC/mL).Results: Chlorhexidine showed antimicrobial action by reducing total microorganisms and S. mutans, while the action of 0.5% Melaleuca Alternifolia was similar to that of distilled water. Listerine and 2%Melaleuca Alternifolia oil reduced total microbial counts by 11% and 9% respectively, and S. mutans by 20% and 11%.Conclusion: A single rinse with 0.12% chlorhexidine is effective in reducing the levels of total microorganisms and S. mutans present in saliva. Under the same testing conditions, Listerine and 0.5% and 2%Melaleuca Alternifolia oil presented lower efficacy than chlorhexidine.

Prevalence of Candida spp. during radiographic examination in Diabetes mellitus patients / Prevalência de Candida spp. durante o exame radiográfico em pacientes diabéticos

Introdução: Relata-se que indivíduos diabéticos são mais susceptíveis a infecções por Candida que indivíduos saudáveis, especialmente se doença periodontal estiver associada. Objetivo: Este estudo propôs avaliar a prevalência de colonização por Candida spp. durante o exame radiográfico em pacientes diabéticos e não diabéticos. Material e Método: Vinte e seis pacientes com Diabetes mellitus do tipo 2 e 20 pacientes sem Diabetes mellitus, apresentando periodontite crônica e Candida spp. na saliva, foram avaliados. Durante o exame radiográfico, amostras de saliva foram coletas: da mucosa oral, do filme radiográfico periapical convencional, sensor radiográfico digital (CDR) e bloco de mordida do posicionador de filmes. Unidades formadoras de colônia (cfu/mL) e identificação das leveduras do gênero Candida foram avaliadas. Resultado: A mucosa oral de ambos os grupos mostrou maior colonização por Candida spp. quando comparada com outras superfícies coletadas (p < 0.05). Nos pacientes diabéticos, a mucosa da região esquerda superior mostrou níveis mais altos de colonização. Nos pacientes não diabéticos, a região de molar superior direito mostrou o nível mais alto de colonização durante o exame no posicionador, no sensor e no lado do filme periapical que não fica voltado para a radiação X. Os níveis de Candida spp. na saliva foram similares entre diabéticos (média = 3.0 × 10(6)) e não diabéticos (média = 3.8 × 10(6)). Conclusão: Nenhuma diferença na colonização por Candida spp. (cfu/mL) em pacientes diabéticos e não diabéticos foi observada nas cinco superfícies coletadas e nas regiões radiográficas simuladas. Candida albicans foi a espécie prevalente de Candida spp. encontrada em todas as amostras.

Introduction: It is suggested that individuals with diabetes are more susceptible to Candida infections than healthy people, especially if periodontal infection is associated. Objective: This study evaluated the prevalence of colonization by Candida spp. during radiographic examination in diabetic and non-diabetic patients. Material and Methods: Twenty-six patients with type 2 diabetes mellitus and 20 patients without diabetes mellitus, presenting chronic periodontitis and presence of Candida spp. in saliva were evaluated. During radiographic examination, samples of saliva were collected from: oral mucosa, conventional radiographic periapical film, digital x-ray sensor (CDR), and bite block of the receptor-positioning device. Colony forming units (cfu/mL) and identification of Candida yeasts were assessed. Result: Oral mucosa from both groups showed the highest colonization with Candida spp. if compared with others surfaces collected (p < 0.05). In diabetic patients, the mucosa of the upper left regions showed higher levels of colonization. In non-diabetic patients, the upper right molar region showed the highest level of colonization during the examination of the receptor-positioning device, the sensor and the non-sensitive film. Candida spp. levels in saliva were similar between diabetics (mean = 3.0 × 10(6)) and non-diabetics (mean = 3.8 × 10(6)). Conclusion: No difference in Candida spp. colonization (cfu/mL) in diabetics and non-diabetic patients was observed for the five collected surfaces and the simulated radiographic region. Candida albicans was the prevalent species of Candida spp. found on all the samples.

Cariogenicidade do leite materno: mito ou evidência científica / Human milk cariogenicity: myth or scientific evidence

Introdução:A amamentação materna tem sido destacada como medida de promoção de saúde, fazendo parte da Política Nacional de Saúde, envolvendo o profissional da Odontologia, porém o leite materno tem sido sugerido como um fator de risco para o desenvolvimento da cárie precoce da infância. Objetivo: Buscar evidências científicas na literatura que comprovem ou refutem a afirmação de que o aleitamento materno está associado com a Cárie Precoce da Infância. Método: A partir da consulta das bases de dados Medline e SciELO, foram incluídos desde estudos laboratoriais a levantamentos epidemiológicos que relacionam o aleitamento materno com a presença da doença cárie. Os descritores utilizados para esta busca foram: "breast feeding" e "dental caries". Constatou-se que não existem evidências científicas adequadas que demonstrem relação clara sobre a cariogenicidade do leite materno, em virtude da doença cárie ser multifatorial, o que a torna susceptível a presença de fatores confundidores, como por exemplo, a introdução precoce da sacarose a dieta do lactente e o início tardio de hábitos de higiene bucal. O aleitamento materno exclusivo deve ser estimulado pelo cirurgião dentista, uma vez que, além dos inegáveis benefícios para a saúde física e psicológica da criança, favorece um crescimento facial harmônico e previne o desenvolvimento de deglutição atípica e de maloclusões, em conjunto com a inserção precoce de hábitos de higiene e dieta não cariogênica. Conclusão: Não existem evidências científicas que suportem a afirmação de que o aleitamento materno está associado com a Cárie Precoce da Infância.

Introduction: Breast-feeding has stood out as health care measure and is part of the Government's National Health Policy, involving dental professionals. However, it has been suggested that breast milk could be a risk factor for the development of early childhood caries. Objective: The purpose of this report was to search for scientific evidence that would support or refute the statement that breastfeeding is associated with the development of early childhood caries. Method: Medline and SciELO databases were consulted to retrieve studies, ranging from laboratory investigations to epidemiological surveys, which relate breastfeeding to dental caries. The key words 'breast-feeding' and 'dental caries' were used on the reference search. There was no scientific evidence that could demonstrate a clear relationship between breast milk and cariogenicity. This is attributed to fact that dental caries is a multifactorial disease that is susceptible to multiple confusing factors, among which the early introduction of sucrose to the infant's diet and late introduction of oral hygiene habits. The dentist should encourage exclusive breast-feeding because, in addition to the undeniable benefits to the child's physical and psychological health, it contributes to a harmonic facial growth and prevents the development of atypical deglutition and malocclusions, in combination with early introduction of oral hygiene habits and noncariogenic diet. Conclusion: There is no scientific evidence to demonstrate an association between breast-feeding and early childhood caries.

Estudo microbiológico comparativo entre sabão de clorexidina 2% e um novo sabão antisséptico para lavagem pré-operatória das mãos / Microbiological study comparing 2% chlorhexidine soap and a new antiseptic soap for preoperative handwashing

Objetivos: avaliar, por meio de estudo microbiológico, dois tipos de sabão propostos para a lavagem das mãos na preparação dos cirurgiões no tempo pré-operatório; comparando um sabão com potência antibacteriana já conhecida e um novo sabão formulado a partir de óleos vegetais. Materiais e métodos: Dez voluntários fizeram a escovação das mãos, segundo protocolos pré-estabelecidos para a rotina de medidas de antissepsia em centros cirúrgicos, com 3 sabões diferentes, sendo um sabão comum (comercial) sem poder antisséptico que serviu como Grupo Controle (I), um sabão de digluconato de clorexidina a 2% (Grupo II) e um novo sabão feito a partir de óleos vegetais numa concentração de 20%, que foi desenvolvido pelo Instituto de Química Unesp/araraquara no Grupo de Materiais Fotônicos, denominado surfactante a 20% (Grupo III). antes de lavar as mãos, logo após e uma hora depois com o uso de luvas cirúrgicas, foi realizada a coleta microbiológica. Resultados: Pelos resultados da aNoVa, verificam-se as seguintes diferenças significativas para o número de colônias bacterianas: entre tipos de sabão (menor número de colônias no sabão do Grupo II), entre tempos (redução do número de colônias no sabão do Grupo II) e efeito significativo da interação sabão versus tempo. Conclusão: o sabão de digluconato de clorexidina 2% mostrou um comportamento melhor em reduzir o número de colônias bacterianas das mãos imediatamente após a lavagem e continuou sendo superior após uma hora com o uso de luvas, quando comparado ao sabão de surfactante a 20%.

Objective: To evaluate, by means of a microbiologic study, two kinds of soaps suggested by surgeons for presurgical handwashing, comparing a well-known antibacterial soap with a new soap formulated from vegetable oils. Materials and methods: Ten volunteers performed handwashing according to previously established protocols for routine antisepsis in operating rooms using 3 different soaps: a common, commercially marketed soap, serving as the control group (Group 1), with no antibacterial characteristics; a soap with 2% chlorhexidine (Group II); and a new soap formulated from vegetable oils at a concentration of 20%, known as surfactant, which was designed by the Chemistry Institute (Unesp/Araraquara - Grupo de Materiais Fotônicos) (Group III). The microbiological samples were collected immediately before and after handwashing and one hour later with the volunteer wearing surgical gloves. Results: ANOVA revealed that the following significant differences are found in the number of bacterial colonies: between soap types (a smaller number of colonies in the Group II soap), between periods (reduction in the number of colonies in the Group II soap), and the significant effect of the soap versus time interaction. Conclusion: The 2% chlorhexidine soap performed better in reducing the number of bacterial colonies on the hands immediately after handwashing and after one hour with the use of surgical gloves, when compared to the 20% surfactant soap.

Typing Candida albicans oral isolates from healthy Brazilian schoolchildren using multilocus enzyme electrophoresis reveals two highly polymorphic taxa

The genetic diversity of C. albicans oral isolates from 75 healthy schoolchildren from eight schools located in different geographic areas of Piracicaba city, São Paulo state, Brazil, was established using isoenzymes marker (Multilocus Enzyme Electrophoresis - MLEE) and cluster analysis. Patterns of monoclonal and polyclonal oral colonization by C. albicans within and between groups of schoolchildren were identified. However, significant divergence between the observed and the expected genotypic frequencies (Hardy-Weinberg equilibrium test) was not detected in the geographically adjacent groups, suggesting the hypothesis that populations of healthy schoolchildren do not correspond to the selection factor (differential survival) of strains. Two highly polymorphic and distantly genetically related taxa (A and B) were identified within the total population of yeasts, each contained subgroups (A1, A2, A3, A4, B1 and B2) and clusters of moderately related strains (from I to X), suggesting the existence of strains restricted or not to certain groups of geographically limited, healthy students. However, the coexistence of identical strains in healthy schoolchildren from the same school (geographically related) reinforces the hypothesis of oral transmission, where the sources of propagation could be explored. Furthermore, this could also be used in current and retrospective analyses of C. albicans isolated from immunocompetent and immunocompromised people, in order to detect commensal or potentially pathogenic yeast groups, predominantly in candidiasis, and in the development of strategies to prevent transmission or human propagation.

Effects of oral environment stabilization procedures on Streptococcus mutans counts in pregnant women

The aim of this study was to determine the effect of oral environment stabilization (OES) on the counting of Streptococcus mutans in high-caries-risk pregnant women participants of a prevention program in a public teaching institution. The sample was composed of 30 pregnant women aged 18 to 43 years, who looked for treatment at the Preventive Dentistry Clinic of the Araraquara Dental School, UNESP. Saliva samples were collected before and after the OES procedures and were forwarded to the pathology for observation and quantification of S. mutans CFU. There was a decrease in the number of S. mutans CFU, which was significantly different (p<0.0001) between samples. Considering the age group, 70.0 percent were between 18 to 30 years old and 30.0 percent belonged to the 31-43-year-old age group. Data related to the pregnancy period showed that 73.4 percent were in the second trimester, 13.3 percent in the first and 13.3 percent in third trimester. OES showed to be an effective clinical procedure in diminishing the number of S. mutans CFU in the saliva of high-caries-risk pregnant women. This management is simple and effective, corresponding to the basic treatment needs of pregnant women that search dental care in this public service.

O objetivo desta pesquisa foi determinar o efeito da adequação do meio bucal sobre a contagem de Streptococcus mutans em gestantes de alto risco à cárie, participantes de um programa de prevenção em uma instituição de ensino público, antes e após adequação do meio bucal. Amostras de saliva de 30 gestantes (18 a 43 anos) que procuraram atendimento na Clínica de Odontologia Preventiva da FOAr-UNESP foram coletadas antes e após procedimentos de adequação do meio bucal, e examinadas para observação e contagem das UFCs de S. mutans. Foi demonstrado que houve diminuição na quantidade das UFCs (p<0,0001) entre as amostras. Em relação à faixa etária, 70,0 por cento das gestantes tinham entre 18 e 30 anos de idade e 30,0 por cento pertenciam à faixa etária de 31 a 43 anos. Dados relativos ao período da gestação revelaram que 73,4 por cento estavam no 2º trimestre e 13,3 por cento estavam igualitariamente no 1º e 3º trimestres. A adequação do meio bucal se mostrou eficaz na diminuição das UFCs de S. mutans presentes na saliva de gestantes de alto risco de cárie. Este procedimento é simples e extremamente efetivo, atendendo às necessidades de tratamento básico de gestantes que procuram atendimento odontológico no serviço público de saúde.

Achados clínicos, genéticos e microbiológicos de uma família com Periodontite Agressiva em Maceió / Clinical, microbiological and genetics findings of a family with Aggressive Periodontitis from Maceio

O presente estudo relata achados clínicos, genéticos e microbiológicos de indivíduos de uma família com periodontite agressiva (PA) residente em Maceió - AL, Brasil. Quatorze membros da família foram submetidos a exames clínicos periodontais, coleta de células da mucosa oral para extração de DNA e coleta de fluido subgengival para detecção de cinco espécies de periodontopatógenos por meio da PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). Polimorfismos nos genes Interleucina 4 e 10 (IL4 e IL10) foram investigados em cada indivíduo por meio da PCR-RFLP (Polimorfismo por Comprimento de Fragmento de Restrição). Seis membros da família apresentaram PA generalizada e oito foram considerados não afetados pela PA. Não houve associação de alelos, genótipos e haplótipos nos genes IL10 e IL4 com a presença de PA na família estudada. Treponema denticola (T.d.) foi o patógeno prevalente, seguido por Tannerella forsythia (T.f.). Houve correlação dos parâmetros clínicos investigados (perda de inserção clínica, sangramento à sondagem e profundidade de sondagem) com a presença de T.d., enquanto que para T.f. houve associação deste com o sangramento à sondagem. Conclui-se que, apesar de os polimorfismos investigados não terem relação com a suscetibilidade à PA, a presença de periodontopatógenos está associada a piores índices clínicos periodontais.

The present study reports clinical, microbiological and genetic findings in members of a family with Aggressive Periodontitis (AgP) from Maceió - AL, Brazil. After periodontal exams in fourteen members of the family, DNA was obtained from epithelial buccal cells and microbiological samples were collected from subgingival plaque to detect five species of periodontopathogens by Polymerase Chain Reaction (PCR). PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) was used to investigate human polymorphisms in interleukin genes (IL4, IL10). Six members of the family showed Generalized AgP and eight were considered unaffected by the AgP. There was no association of alleles, genotypes and haplotypes in the IL10 and IL4 genes with the AgP in the studied family. Treponema denticola (T.d.) was the prevalent pathogen, followed by the Tannerella forsythia (T.f.). There was correlation between clinical findings (clinical attachment loss, bleeding on probing and probing depth) with the presence of T.d., while T.f. was correlated with bleeding on probing. In conclusion, although the investigated polimorphisms were not associated with the susceptibility to AgP, the presence of periodontopathogens is related to worse periodontal clinical parameters.

Effect of light-activation on the antibacterial activity of dentin bonding agents

Aim: This study evaluated the effect of light-activation on the antibacterial activity of dentin bonding systems. Methods: Inocula of Streptococcus mutans and Lactobacillus casei cultures were spread on the surface of BHI agar and the materials were applied and subjected or not to light-activation. Zones of bacterial growth inhibition around the discs were measured. Results: Excite, Single Bond and the bond of Clearfil SE Bond (SE) and Clearfil Protect Bond (CP) did not show any antibacterial activity. The strongest inhibitory activity was observed for the primers of CP and Prompt (PR) against S. mutans and the primers of SE andPB against L. casei. Conclusion: Light-activation significantly reduced or suppressed the antibacterial activity of the initially active uncured dentin bonding systems.

Diferentes métodos fenotípicos para isolamento e identificação de espécies de Candida / Different phenotypic methods for isolation and identification of Candida species

C. albicans é o mais frequente agente responsável pela candidíase e está também associada a doençasimunossupressoras como, por exemplo, diabetes. Entretanto, outras espécies não-albicans como C.dubliniensis inicialmente associada com candidíase da orofaringe de pacientes infectados pelo vírus HIV,onde ainda é mais prevalente, tem sido reconhecida como causa de infecção em pacientes com câncer,com fibrose cística e pacientes com diversas patologias e diferentes graus de imunocomprometimento.Utilizando-se métodos fenotípicos para identificação de Candida spp. é possível discriminar rotineiramenteisolados orais em laboratórios de microbiologia. Um dos problemas que interferem na realização de identificaçãodas espécies do gênero Candida em estudos epidemiológicos mais amplos é a dificuldade da rápidaidentificação, a partir de meios de triagem de baixo custo. Dessa forma, alguns métodos fenotípicos sãoapresentados com o objetivo de contribuir na busca de testes alternativos que possam com segurança, seremaplicados às rotinas de laboratórios.

C. albicans is the frequent agent for the oral candidosis and it is also associated to immunosuppressivediseases as, for example, diabetes. However, other non-albicans species such as C. dubliniensis initiallyassociated with candidosis in orofaringe patients infected by the virus HIV, where is still more prevalent,it has been recognized as infection cause in patients with cancer, cystic fibrosis and patients with severalpathologies. Phenotypics methods for Candida spp. are easy-to-use procedures for routine discriminationof oral isolates in the clinical microbiology laboratory. One of the problems that interfere in the identificationaccomplishment of the species of Candida in more wide epidemic studies is the difficulty of the fast identification,starting from screen methods of low cost. In that way, some phenotypics methods are presented withthe objective of contributing in the search of alternative tests to be applied as routine in laboratories.

Caso familiar de periodontite agressiva: achados clínicos, microbiológicos e genéticos / A familial case of aggressive periodontitis: clinical, microbiological and genetic findings

This study reports the clinical, microbiological and genetic findings in members of a Brazilian family with Aggressive Periodontitis (AgP). After periodontal exams in eleven members of the family, microbiological samples were collected from subgingival plaque and DNA were obtained from epithelial buccal cells. Polymerase Chain Reaction (PCR) was utilized to detect five species of periodontopathogens. PCR-RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) and sequencing were used to investigate human polymorphisms in interleukin genes (IL4, IL10). Six members of the family showed Generalized AgP, four had Localized AgP and only one was considered unaffected by AgP. Aggregatibacter actinomycetemcomitans was the most prevalent pathogen (72.7%). The presence of Porphyromonas gingivalis was correlated with clinical findings (visible plaque, bleeding on probing and probing depth, p = 0.03). The genetic analyses revealed that 60% of the kindred affected by AgP showed specifc IL4/ IL10 haplotypes combinations. The predominance of AgP in this family could be influenced by the amount of plaque and subgingival Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Indeed, infection by Porphyromonas gingivalis was associated with clinical parameters of periodontitis. Although the majority of AgP family members presented at least one TTD/ ATA (IL4/ IL10) haplotype combination, it was unable to demonstrate an association with AgP.

Este estudo relata achados clínicos, microbiológicos e genéticos em indivíduos de uma família brasileira com Periodontite Agressiva (PA). Após exames periodontais realizados em onze membros da família, foram coletadas amostras microbiológicas de placa subgengival e DNA de células da mucosa oral. A Reação em Cadeia da Polimerase (do inglês, PCR) foi utilizada para detectar cinco espécies de periodontopatógenos. As técnicas do Polimorfismo por Comprimento de Fragmento de Restrição (RFLP) e sequenciamento foram usados para investigar polimorfismos humanos em genes da interleucina (IL4, IL10). Seis membros da família apresentaram PA Generalizada, quatro PA Localizada e apenas um indivíduo foi considerado não afetado pela PA. Aggregatibacter actinomycetemcomitans foi o patógeno prevalente (72,7%). A presença de Porphyromonas gingivalis foi relacionada com achados clínicos (placa visível, sangramento à sondagem e profundidade de sondagem, p = 0,03). A análise genética revelou que 60% dos membros da família afetados pela PA carregavam o mesmo haplótipo formado por uma combinação de alelos dos genes IL4/ IL10. O predomínio de PA nesta família pode ter sido influenciada pela quantidade de placa bacteriana e prevalência de Aggregatibacter actinomycetemcomitans presente no sulco gengival. A infecção por Porphyromonas gingivalis pode ser associada com parâmetros clínicos relacionados a periodontite. Embora a maioria dos membros afetados pela PA tenha apresentado pelo menos uma combinação de haplótipos TTD/ ATA (IL4/ IL10), não foi possível demonstrar estatisticamente uma associação com PA

Genetic polymorphism of Streptococcus mutans strains associated with incomplete caries removal

Aim: Despite the antibacterial properties of dental materials, the survival of residual bacteria under restorations has been demonstrated after incomplete caries removal. The aim of this study was to evaluate the genetic polymorphism of Streptococcus mutans strains isolated from deep dentinal lesions before and three months after incomplete caries removal. Methods: Samples of carious dentin were collected from 33 primary and/or permanent molars before and after indirect pulp treatment and processed for microbiological isolation of mutans streptococci (MS). After three months of the dental treatment, positive cultures for MS were detected in only ten of these teeth. DNA of MS isolates were obtained and subjected to polymerase chain reaction (PCR) for identification of S mutans. The arbitrary primed-PCR method (primer OPA-13) was used to detect the genetic polymorphism of S. mutans strains. Results: Identical or highly related S. mutans genotypes were observed in each tooth, regardless of the collect. Considering each tooth separately, a maximum of nine genotypic patterns were found in each tooth from all the collects. In addition, at least one genotypic pattern was repeated in the three collects. Genetic diversity was observed among the S. mutans isolates, obtained from different teeth after three months of the dental treatment. Conclusions: The persistence of identical genotypic patterns and the genetic similarity among the isolates, from the same tooth in distinct collects, showed the resistance of some S. mutans strains after incomplete caries removal treatment.

DMFT index assessment and microbiological analysis of Streptococcus mutans in institutionalized patients with special needs

Aim: To assess the DMFT (D = decayed; M = missing; F = filled) index of institutionalized patients with mild and moderate physical and mental disabilities and to correlate it with the Streptococcus mutans (S. mutans) counts in the supragingival bacterial biofilm. Methods: Dental examination of 28 patients aged 15 to 25 years was conducted to determine the DMFT index (number of decayed, missing and filled teeth). Supragingival plaque samples were collected from the buccal surfaces of all teeth. The samples were inoculated in SB20 medium and incubated at 37 °C for 48 hours. Spearman’s correlation test was applied (p = 0.05) to evaluate the correlation between the DMFT index and the amount of S. mutans. Results: The mean DMFT recorded was 7.68 and a large mean number of S. mutans colony-forming units (cfu > 106) was found. No statistically significant correlation was found between the DMFT index and the number of S. mutans. Conclusions: Under the conditions of this study, no correlation was found between the DMFT index and the number of S. mutans cfu in institutionalized patients with mental retardation and physical disabilities.

Pacifier disinfection procedure: superficial morphological aspects and microorganisms colonization / Desinfecção de chupetas: aspectosmorfológicos e colonização de microrganismos

Introduction and Objective: Evaluate superficial changes as well as the presence of C. albicans and S. mutans on latex and silicone pacifiers. Material and Methods: after thermal treatment and disinfection, forty latex and silicone pacifiers fragments were contaminated and submitted to boiling water during 5 and 10 minutes and microwave energy during 5 minutes. Results: Scanning Electron Microscopy revealed the greatest superficial alterations on latex samples compared to silicone. In despite of thermal treatment, none sample revealed the occurrence of S. mutans and C. albicans. Conclusion: Silicone pacifiers and the microwave energy showed to be the most appropriate and effective domestic procedure for disinfections of pacifiers.

Introdução e objetivos: Avaliar as alterações superficiais e a presença de C. albicans e S. mutans na superfície de chupetas de látex e silicone. Material e métodos: Após tratamento térmico e desinfecção, 40 fragmentos de chupetas de látex e silicone foram contaminados e submetidos a fervura em água durante 5 e 10 minutos e forno de microondas por 5 minutos. Resultados: A análise por microscopia eletrônica de varredura revelou maiores alterações superficiais nas amostras de látex quando comparadas às de silicone. Independentemente do tratamento térmico, todas as amostras revelaram a ausência de S. mutans e C. albicans. Conclusão: O tratamento térmico com microondas para as chupetas de silicone demonstrou ser o procedimento doméstico mais apropriado e eficiente para a desinfecção de chupetas.

Comparative study of the clinical and anti-microbial efficacy of tongue cleaners

Candida species have frequently been isolated from the oral cavities of a variety of patients, such as elderly people, dentures users,immunocompromised and health patients. Yeasts may be associated with immune response and local factors such as poor oral hygiene. It was evaluated effectiveness of tongue cleaner showing which types would be preferred by patients, changes in tongue coating and in saliva yeasts counting. Thirty patients were selected and randomly distributed into three groups. This crossover blind study evaluated the effect of tongue cleaning using: a plastic and a steel tongue scraper and a nylon soft-bristle toothbrush. All patients were instructed to use the cleaners twice a day for one week (fifteen-day wash-out period). Saliva and tongue coating samples were collected from each patient from each test period, the yeasts were counted by colony forming units per mL (CFU/mL) and the species were identified. The patients were questioned about cleaner preference. An increase in the percentage of patients with no tongue coating after scraping was observed. A reduction in the mean number of Candida species in tongue coating was observed only after nylon soft-bristle toothbrush cleaner. Candida albicans was the prevalent species. Volunteers preferred to the steel tongue scraper(60%). Tongue cleaners reduced the tongue coating and the mean number of salivaÆs yeasts. Degree of tongue coating favors the Candida species colonization.